不同的细胞有什么不同
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细胞培养,尤其是细胞系的培养,对常规细胞而言,需要善于总结经验。然而除了基本步骤,还有哪些技巧可以让细胞养的更加漂亮呢?
1. 不同的细胞,喜欢的环境是不一样的
这个不仅仅是说培养基的不同,还有就是细胞生长的空间密度问题。
有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。
2. 关于培养瓶内加入培养基的量的问题
这个确实需要自行摸索。有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。对于生长速度快的细胞,易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。但是要注意换液掌握
3. 关于选择培养瓶的问题
生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性塑料瓶相对好一些。而对于同一种细胞,在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比塑料瓶内好。这可能是因为塑料瓶比玻璃瓶更容易贴壁。生长速度快的细胞在塑料瓶这种相对「更安逸」的环境里反而长得状态不如玻璃瓶好。
所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态,塑料瓶比玻璃瓶会好,对于生长速度慢的细胞,玻璃瓶则会更好。同样,对于同一种细胞,在其生长速度慢的时候,塑料瓶会好一点,比如刚刚复苏的时候,或者原代培养的时候。而在其生长旺盛的时候,玻璃瓶则相对会好一点。
4. 传代时消化的问题
对于需要消化传代的细胞,每一次的消化都是对这个细胞存活与否,状态好与不好最至关重要的考验。
在消化的过程中,加入胰酶后,所有细胞都在被胰酶消化着,但是我们忽视了一个问题就是,细胞的生长状态是不一样的,每一个细胞的贴壁情况也是不一样的,有的贴壁牢固,有的贴壁没有那么牢固的,所以,让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的,他们受到了差别待遇当然会有「脾气」。
5. 关于换液传代时候洗瓶的问题
对于用 DMEM 培养基培养的细胞,你在洗的时候如果是用无血清1640去洗细胞在随即后的几次中会比用 DMEM 洗的长的要好。同样,用 1640 培养的也有这个现象。
也可以用 PBS 来洗,洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的,对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清,防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先,是很关键的一点。
非小细胞肺癌有不同的亚型,治疗和预后不一样,有不少个体化治疗方法。然而,小细胞肺癌仍然被认为是一种同质性的癌症,在临床通常用统一的方式进行治疗。
最新的研究表明,小细胞肺癌也有不同的亚型,这些亚型有哪些不同?治疗方式和临床效果如何呢?
凶险的小细胞肺癌
小细胞肺癌约占新发肺癌的15-20%。虽然占比不高,但是它生长迅速、转移较早、预后较差,是很凶险的肺癌类型。小细胞肺癌和吸烟密切相关,几乎所有的患者都有吸烟史。小细胞肺癌通常没有类似EGFR和ALK这种驱动基因突变,这就导致没有什么靶向药能用。
非小细胞肺癌可被分为不同的亚型,比如肺鳞癌和肺腺癌;亚型里根据基因突变和表达的不同又可进一步细分,亚型的治疗方式和临床效果都有所不同。
那么小细胞肺癌呢?最近一项新的研究发现1,根据几种蛋白的表达情况,小细胞肺癌可分为五种亚型,这些亚型的生存期有所差别, 对化疗的敏感度也不同。
五种小细胞肺癌亚型
研究者们检查了386例手术切除的小细胞肺癌,这是迄今为止最大的手术治疗患者队列之一。研究者通过免疫组化(IHC)的手段测量了四个亚型特异性转录因子蛋白和P53及RB1蛋白的表达。这四个亚型特异性蛋白是ASCL1、NEUROD1、POU2F3、YAP1,它们的组织分布和预后相关性是小细胞肺癌研究里的活跃领域。
这五种小细胞肺癌亚型如下:
SCLC-A亚型,表达ASCL1为主;SCLC-AN亚型,同时表达ASCL1和NEUROD1;SCLC-N亚型,表达NEUROD1为主;SCLC-P亚型,表达POU2F3为主;SCLC-QN亚型,四种基因均不表达,也被称为四阴型。其中,SCLC-P和SCLC-QN也被称为非神经内分泌亚型,SCLC-A、SCLC-N、SCLC-AN也被称为神经内分泌亚型。
哪种亚型生存率高?
研究者发现,非神经内分泌亚型(SCLC-P和SCLC-QN)的总生存率高一些,而神经内分泌亚型(SCLC-A、SCLC-AN、SCLC-N)的总生存率较低。
具体到这四个蛋白,ASCL1蛋白的高表达,则意味着预后可能不太好;而POU2F3蛋白的高表达通常意味着更长的生存期。
图3. 研究的两个数据集里,患者的临床特征和蛋白表达同总生存期的关系。一个因素的Hazard ratio越高,意味着它和更差的生存率相关
对治疗的不同反应呢?研究者通过蛋白质组学和细胞存活率测试,研究了26个人类小细胞肺癌细胞系的亚型特异性蛋白和各种治疗药物的体外疗效之间的相关性。
POU2F3的高表达不仅和更好的生存率有关,也和肿瘤对标准化疗药物更敏感有关,而YAP1蛋白的高表达与化疗反应差有关。虽然YAP1并没有用来定义单独的亚型,但是它的表达和化疗反应相关,也是一个很重要的蛋白。
小结
这项研究发表在《病理学杂志》,具有重要的临床意义,它揭示了小细胞肺癌的多样性:小细胞肺癌并非单一的同质性癌症,有至少五种不同的亚型,不同亚型的预后和对治疗的反应有所不同。相信在不久的将来,小细胞肺癌的个性化治疗会不断发展,为更多患者带来更多的获益。
一、细胞学说及其建立过程
(1)细胞学说内容
细胞学说的建立者主要是两位德国科学家施莱登(M. J.Schleiden, 1804- -1881 )和施旺 ( T. Schwann, 1810- 1882图1-1)。后人根据他们分别于1838年和1839年发表的研究结果进行整理并加以修正,综合为以下要点:
1.细胞是一个有机体,一切动植物都由细胞发育而来,并由细胞和细胞产物所构成;
2.细胞是一个相对独立的单位,既有它自己的生命,又对与其他细胞共同组成的整体生命起作用;
3.新细胞是由老细胞分裂产生的。
(2)细胞学说的建立过程
1.从人体的解剖和观察入手一-从器官到组织
?1543年,比利时的维萨里发表了(人体构造》
?法国的比夏指出器官由组织构成
2.显微观察资料的积累一认识细胞
?1665年.英国的罗伯特.虎克发现并命名“细胞”
?荷兰的列文虎克用自制的显微镜观察到不同形态的细菌、红细胞和精子等
3.科学观察和归纳概括的结合一形成理论
?1838年,施莱登首先提出植物体都是由细胞构成的.细胞是植物体的基本单位
1839年,施旺发表了研究报告(关于动植物的结构及一致性的显微研究)
4.细胞学说在修正中前进
?1858年,德国的魏尔直总结出“细胞通过分裂产生新细胞”
(3)细胞学说建立的意义
细胞学说揭示了动物和植物的统一性,从而阐明了生物界的统一性。就像原子论之于化学一样,细胞学说对于生物学的发展具有重大意义。
二、细胞是基本的生命系统
正如施旺所说:每个细胞都相对独立地生活着,但同时又从属于有机体的整体功能单细胞生物能够独立完成生命活动,多细胞生物依赖各种分化的细胞密切合作.共同完成一系列复杂的生命活动。例如,缩手反射就是由一系列不同的细胞共同参与完成的比较复杂的生命活动。 事实上,动植物以细胞代谢为基础的各种生理活动,以细胞增殖、分化为基础的生长发育,以细胞内基因的传递和变化为基础的遗传与变异,等等,都说明细胞是生命活动的基本单位,生命活动离不开细胞。
小小的细胞为什么具有如此强大的功能呢?细胞虽小,但其结构却复杂而精巧。细胞是一个由各种组分相互配合而组成的复杂的系统。细胞是有生命的,是一个生命系统。
在多细胞生物体内,细胞又是构成组织的组分,组织是构成器官的组分,器官是构成个体的组分。组织、器官、个体都是有生命活动的整体,因此是不同层次的生命系统。
在自然界,生物个体都不是单独存在的,而是与其他同种和不同种的个体以及无机环境相互依赖、相互影响的。在一定的空间范围内,同种生物的所有个体形成一个整体——种群,不同种群相互作用形成更大的整体——群落, 群落与无机环境相互作用形成更大的整体——生态系统,地球上所有的生态系统相互关联构成更大的整体——生物圈。可见,自然界从生物个体到生物圈,可以看作各个层次的生命系统。
审视各层次生命系统的关系,我们发现,无论从结构上还是功能上看:细胞这个生命系统都属于最基本的层次各层次生命系统的形成、维持和运转都是以细胞为基础的,就连生态系统的能量流动和物质循环也不例外。因此,可以说细胞是基本的生命系统。
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